高效液相色譜儀(HPLC)是應用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機化合物的儀器設備。它由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。HPLC廣泛應用于生命科學、食品科學、藥物研究以及環(huán)境研究中。 LC-310高效液相色譜儀的儀器本身是記錄樣品通過檢測器時，吸光度的變化而產(chǎn)生的電信號變化，從而產(chǎn)生色譜譜圖，最終的結(jié)果就要靠后期的色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
譜圖處理完即可制作校正曲線，校正曲線是數(shù)據(jù)處理的重點，是將標樣譜圖的信息與數(shù)據(jù)做成一個標準，供處理試樣譜圖使用。校正是通過分析指定的準備好的標準樣品，來確定計算絕對組分濃度的響應因子的過程。接下來介紹常用的數(shù)據(jù)處理方法：
1.外標法
外標法是指添加一定量的標準品于空白樣品中制成對照樣品，與未知檢測樣品平行進行樣品處理并檢測，根據(jù)對照品響應值與標準品的濃度函數(shù)關系計算出未知檢測樣品中被測組分濃度的定量方法。
2.內(nèi)標法
內(nèi)標法指的是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標物加到一定量的被測樣品混合物中，然后對含有內(nèi)標物的樣品進行色譜分析，分別測定內(nèi)標物和待測組分的峰面積及相對校正因子，按公式計算出被測組分的含量。
3.兩種數(shù)據(jù)處理方法的區(qū)別
內(nèi)標法是把標準物質(zhì)加入到被測樣品中，外標法不是把標準物質(zhì)加入到被測樣品中，而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定。
1、外標法要求儀器重復性很嚴格，適于大量的分析樣品，因為儀器隨著使用會有所變化，因此需要定期進行曲線校正。此法的特點是操作簡單，計算方便，不需測量校正因子，適于自動分析。但儀器的重現(xiàn)性和操作條件的穩(wěn)定性必須保證，否則，會影響實驗結(jié)果。
2、內(nèi)標法要求挺嚴格的，對于內(nèi)標物的選擇要有一定的原則，適于分析樣品量較少的情況；不要求樣品里的所有組分都出峰，只要內(nèi)標物和所關注的組分出峰并分離好就可以了；定量準確，對進樣量和操作條件的控制不很嚴格，但必須準確稱量試樣和內(nèi)標物，否則會影響實驗結(jié)果。
